2 × Taq Platinum PCR Mix
Aktiviteit definysje
1 ienheid (U) Taq Platinum DNA Polymerase-aktiviteit wurdt definieare as de hoemannichte enzyme dy't nedich is om 10 nmol deoxynucleotides op te nimmen yn soere-ûnoplosbere stoffen by 74 ° C binnen 30 min mei aktivearre salm sperm DNA as sjabloan/primer.
Kwaliteitsbeweitsing
De suverens troch SDS-PAGE-detectie is mear dan 99%; Gjin aktiviteit fan eksogene nuklease wurdt ûntdutsen; Ien-kopy-gen yn minsklik genoom koe effektyf wurde fersterke; Gjin signifikante aktiviteitsferoaring by opslaan by keamertemperatuer foar ien wike.
Main Technyske Parameters
It hat 5'-3 'exonuclease-aktiviteit en 3'-5' exonuclease-aktiviteit, en syn trou is neist Pfu-polymerase. De útwreidingssnelheid fan Taq Platinum Polymerase is rapper dan Pfu -polymerase en de amplifikaasje -effisjinsje is heger. PCR -produkten kinne direkt wurde ligeare oan it stompe ein of klone mei TA -fektor. As de kloningseffektiviteit moat wurde ferbettere, wurdt it oanrikkemandearre earst te suverjen en 3'-dA overhangs ta te foegjen foardat it klonen yn TA-fektor.
Taq Platinum MasterMix mei ien buis (Nasjonale High-Tech Produktsertifikaasje)
■ De Taq Platinum MasterMix hat ferbettere spesifisiteit en gefoelichheid fan PCR -reaksje en kin komplekse sjabloanen fersterke mei hege GC -ynhâld, sekundêre struktuer en sa. Sa leech as 2 eksimplaren fan it doelsjabloan kinne wurde fersterke, en soargje foar krekter eksperimintele resultaten.
■ De unike Taq Platinum MasterMix-formule makket it heule reaksjesysteem heul stabyl, en de aktiviteit sil net wurde beynfloede troch werhelle beferzen-ûntdwaan of opslach op lange termyn by 4 ° C.
■ De stabile en effisjinte foarôf tariede PCR mingde oplossing kin de operaasje fluch en ienfâldich meitsje, sterk ferminderje arbeidsintensiteit en samplingflater. Hege prestaasjes PCR-enhancer en optimizer binne ek opnaam yn 'e miks, wat de easken fermindert foar PCR-omstannichheden.
■ Dit produkt hat sawol kleurstof-befettende as kleurstoffrije systemen. Dye-befette MasterMix-produkten kinne direkt wurde elektroforese nei PCR, sûnder tafoegjen fan ladenbuffer.
Oanfraach
It kin Pfu-polymerase ferfange om heechfidelity-produkten te fersterkjen fan komplekse sjabloanen lykas genomes, en it is geskikt foar applikaasjes lykas kloning fan ekspresje-genen, sitespesifike mutaasjes en analyse fan single nucleotide polymorphism (SNP), ensfh.
Foarsoarchsmaatregelen by it ûntwerpen fan PCR -primers:
De primerlange is normaal 20-25 mer. By it útfieren fan lange fragmint PCR moat de primerlengte lykwols wurde ferhege nei 30-35 mer.
■ D'r is gjin komplementêr koppel tusken de twa primers, foaral foar de lêste 3 bases oan 'e 3 ′ ein.
■ GC-ynhâld moat 50-60%wêze, en foarkomme lokale rike GC as AT. Om primer en sjabloan stabyl te meitsjen, foarkomme AT rike struktuer oan 'e 3' -ein.
■ Foarkom primer om sekundêre struktuer te foarmjen.
■ Selektearje twa primers mei Tm -temperatueren ticht by elkoar.
Berekkening fan Tm -wearde fan primers foar PCR:
■ As de primer minder dan 20 mer is: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ As de primer mear is as 20 mer: Tm = 81,5+0,41 × (GC%)-600/L, wêrby L de lingte fan 'e primer is.
■ Stel de gloeitemperatuer yn op (Tm-5) ° C.
PCR Primer Ynfier
De passende definitive konsintraasje fan primers kin wurde selekteare tusken 0.1 μM en 1.0 μM. Te leech in primer-konsintraasje liedt ta lege opbringst fan amplifikaasjeprodukten, wylst te hege primer-konsintraasje faker is foar net-spesifike amplifikaasje. Gewoanlik, as de hoemannichte sjabloan -DNA grut is as komplekse sjabloan -DNA (lykas minsklik genoom -DNA) wurdt brûkt as sjabloan, moat de primer -konsintraasje leger wêze. As de hoemannichte sjabloan -DNA lyts is as ienfâldich sjabloan -DNA (bgl. Plasmide -DNA, ensfh.) As sjabloan wurdt brûkt, moat de primer -konsintraasje heger wêze.
Alle produkten kinne wurde oanpast foar ODM/OEM. Foar details,klikje asjebleaft op Oanpaste tsjinst (ODM/OEM)
  |
Brûk genomysk DNA as sjabloan om it fragmint fan 1 kb te fersterkjen. Nei de PCR -reaksje, nim dan 5 μl foar detectie fan elektroforese. |
A-1 sjabloan
■ De sjabloan befettet proteïne -ûnreinheden as Taq -ynhibitoren, ensfh .——Zuiverje DNA -sjabloan, ferwiderje proteïne -ûnreinheden of extract sjabloan -DNA mei suveringskits.
■ De denaturaasje fan sjabloan is net kompleet —— Passend fergrutsje denaturationstemperatuer en ferlingje denaturationstiid.
■ Degradaasje fan sjabloan —— Stel de sjabloan opnij foar.
A-2 Primer
■ Slechte kwaliteit fan primers —— Re-synthesize de primer.
■ Degradaasje fan primer ——Aliquotearje de primers mei hege konsintraasje yn lyts folume foar behâld. Foarkom meardere beferzen en ûntdûke as lang termyn 4 ° C kryopreserveare.
■ Unjildich ûntwerp fan primers (bgl. Primerlengte net genôch, dimer foarme tusken primers, ensfh.) -Resign primers (foarkomme foarming fan primer dimer en sekundêre struktuer)
A-3 Mg2+konsintraasje
■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.
A-4 Annealing temperatuer
■ De hege gloeitemperatuer hat ynfloed op de bining fan primer en sjabloan. ——Ferminderje de annealtemperatuer en optimalisearje de kondysje mei in helling fan 2 ° C.
A-5 Utwreidingstiid
■ Koarte ferlingstiid —— Fergrutsje ferlingstiid.
Fenomenen: Negative samples litte ek de doelfolgjende bannen sjen.
A-1 fersmoarging fan PCR
■ Krúsbesmetting fan doelfolging as fersterkingsprodukten —— Foarsichtich it monster mei doelsekwinsje net foarsichtich pipette yn 'e negative stekproef of se út' e sintrifugebuis smite. De reagents of apparatuer moatte autoklave wurde om besteande nukleinsoeren te eliminearjen, en it bestean fan besmetting moat wurde bepaald troch negative kontrole -eksperiminten.
■ Kontaminaasje fan reagens ——Aliquot de reagentjes en bewarje se op lege temperatuer.
A-2 Primer
■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.
■ Unjildich primer-ûntwerp, en de doelfolging hat homology mei de net-doelfolging. —— Re-ûntwerp primers.
Fenomenen: De PCR-amplifikaasjebannen binne ynkonsistint mei de ferwachte grutte, itsij grut as lyts, of soms komme sawol spesifike amplifikaasjebannen as net-spesifike amplifikaasjebannen foar.
A-1 Primer
■ Slechte primer -spesifisiteit
—— Re-ûntwerp primer.
■ De primer -konsintraasje is te heech —— Fergrutsje de denaturaasje -temperatuer juste en ferlingje denaturaasje -tiid.
A-2 mg2+ konsintraasje
■ De Mg2+ konsintraasje is te heech ——Krekt ferminderje de Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.
A-3 Thermostable polymerase
■ Oermjittich enzymbedrach ——Ferminderje enzymehoeveelheid passend mei yntervallen fan 0,5 U.
A-4 Annealing temperatuer
■ De gloeitemperatuer is te leech —— Passend ferheegje de annealtemperatuer as nim de twa-etappe gloeimetoade oan
A-5 PCR-syklusen
■ Te folle PCR -syklusen ——Ferminderje it oantal PCR -syklusen.
A-1 Primer——Slechte spesifisiteit ——Re-ûntwerp de primer, feroarje de posysje en lingte fan 'e primer om de spesifisiteit te ferbetterjen; of nêst PCR útfiere.
A-2 Template DNA
——De sjabloan is net suver—— Suverje de sjabloan as extract DNA mei suveringskits.
A-3 Mg2+ konsintraasje
——Mg2+ konsintraasje is te heech ——Properyk ferminderje2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.
A-4 dNTP
——De konsintraasje fan dNTP's is te heech ——Ferminderje de konsintraasje fan dNTP passend
A-5 Annealing temperatuer
—— Te lege annealtemperatuer —— Passend ferheegje de gloeitemperatuer
A-6 syklusen
——Tefolle syklusen——Optimalisearje it syklusnûmer
De earste stap is om de passende polymerase te kiezen. Regelmjittige Taq-polymerase kin net korrekturlêze fanwegen gebrek oan 3'-5 'eksonukleaseaktiviteit, en mismatch sil de útwreidingseffektiviteit fan fragminten sterk ferminderje. Dêrom kin gewoane Taq -polymerase doelfragminten grutter dan 5 kb net effektyf fersterkje. Taq -polymerase mei spesjale modifikaasje as oare high fidelity -polymerase moat wurde selekteare om de effisjinsje fan útwreiding te ferbetterjen en te foldwaan oan 'e behoeften fan amplifikaasje fan lange fragminten. Derneist fereasket de fersterking fan lange fragminten ek oerienkommende oanpassing fan primer-ûntwerp, denaturaasje-tiid, ferlingingstiid, buffer-pH, ensfh Normaal kinne primers mei 18-24 bp liede ta bettere opbringst. Om sjabloanskade te foarkommen, soe de denaturaasje -tiid by 94 ° C moatte wurde fermindere oant 30 sekonden of minder per syklus, en de tiid om temperatuer te ferheegjen nei 94 ° C foar amplifikaasje moat minder dan 1 min wêze. Boppedat kin de útwreidingstemperatuer ynstelle op sawat 68 ° C en it ûntwerpen fan de ferlingingstiid neffens de snelheid fan 1 kb/min kin soargje foar effektive amplifikaasje fan lange fragminten.
De flaterpersintaazje fan PCR -amplifikaasje kin wurde fermindere troch ferskate DNA -polymerasen te brûken mei hege trou. Under alle Taq DNA -polymerasen dy't oant no ta binne fûn, hat Pfu -enzym it leechste flaterfrekwinsje en de heechste trou (sjoch taheakke tabel). Neist enzyme -seleksje kinne ûndersikers de PCR -mutaasjesnelheid fierder ferminderje troch optimalisearjen fan reaksjebetingsten, ynklusyf optimalisearjen fan buffersammensetning, konsintraasje fan thermostabele polymerase en optimalisearjen fan PCR -syklusnûmer.
Produktkategoryen
WAAROM KEUZE ONS
Sûnt syn oprjochting hat ús fabryk produkten fan wrâldklasse ûntwikkele mei it folgjen fan it prinsipe
fan kwaliteit earst. Us produkten hawwe poerbêste reputaasje opdien yn 'e sektor en weardefolle fertrouwen ûnder nije en âlde klanten ..
- Tillefoan: +86 010-59822688
- Gebou 5, No .. 86, Shuangying West Road, Changping District, Peking.
- people@tiangen.com
