2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Rapid PCR -foarmix mei hege effisjinsje en hege stresweerstand.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ is in nij optimalisearre en opwurdearre klear te brûken 2 × PCR-foarmix mei alle essensjele dielen yn PCR-reaksje útsein DNA-sjabloan en primers.

Kat. Nee Packing Grutte
4993001 1 ml
4993002 5 x1ml
4992912 20 x 5 x 1 ml
4992913 5 × 1 ml
4992920 20 × 5 × 1ml
4992921 20 × 5 × 1ml

Produkt Detail

Eksperimintele foarbyld

FAQ

Produkt tags

Features

■ Hege amplifikaasje -effisjinsje: DNA -fragminten fan ferskate grutte (leger dan 5 kb) en boarnen kinne effisjint wurde fersterke.
■ Hege gefoelichheid: Sa leech 10 pg doelfragminten kinne wurde fersterke út genomyske sjabloanen.
■ Hege stressresistinsje: Foar sjabloanen mei in hege ûnreinheidsynhâld lykas rûge-extracteare sjabloan/baktearjekultuer kin it doelfragment maklik wurde fersterke. De polymerase -aktiviteit sil net wurde beynfloede troch werhelle befriezen en ûntdwaan.
■ Handich foar applikaasjes: It reaksysteem waard maklik en fluch taret. It fersterke fragmint befettet de 3'-ein dA-overhang, wat handich is foar TA-kloning.

Spesifikaasje

Type: Taq DNA polymerase
Foarbyld: Suverere/rûge-extracted sjabloan/baktearje kultuer
Sjabloan: > 10 blz
Fragmentgrutte: <5 kb
Oanfraach: PCR-amplifikaasje fan DNA-fragminten, DNA-markearring, primer-útwreiding, sekwinsjebestimming, grutskalige gendeteksje, semi-kwantitative PCR-eksperiminten, opspoaren fan spoar-DNA, ensfh.

Alle produkten kinne wurde oanpast foar ODM/OEM. Foar details,klikje asjebleaft op Oanpaste tsjinst (ODM/OEM)


  • Foarige:
  • Folgjende:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Figuer 1. Sjabloanen út ferskate boarnen waarden fersterke troch respektivelik TIANGEN Taq MasterMix II en de gewoane Taq Mix fan Supplier TR om de spanningsresistinsje fan 'e reagents te detektearjen. De resultaten litte sjen dat TIANGEN -produkten de doelfragminten kinne fersterke út rûge genomyske sjabloanen en baktearjekultuer, en de stresweerstand is better dan dy fan Supplier TR. A: Ruw genomysk sjabloan extracted by TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit. Prp/DN: Rûge ekstraksje en opspoaren fan minsklike bloedmonsters. Rys: Rûge ekstraksje en opspoaren fan rysmonsters. B: Koloanje PCR. It PCR -fragmint is 700 bp.
    M: TIANGEN Marker III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Goede universaliteit foar sjabloanen út ferskate boarnen en mei ferskate lingten
    Figuer 2. Fragminten fan ferskate boarnen en lingten waarden fersterke mei TIANGEN Taq MasterMix II (A) en gewoan Taq Ming fan leveransier TK (B), leveransier TR (C), leveransier V (D) en leveransier G (E) respektivelik. De resultaten litte sjen dat de wiidweidige prestaasjes fan TIANGEN -produkten de bêste binne yn termen fan amplifikaasjefermogen, spesifisiteit en universaliteit.M: TIANGEN Marker III1: Soybean genomic DNA template (120 bp);

    2-3: Rys ​​genomysk DNA-sjabloan (694 bp, 2258 bp);

    4: Katoen genomysk DNA -sjabloan (200 bp);

    5: Escherichia coli genomysk DNA -sjabloan (2298 bp);

    6-7: Músgenoom DNA-sjabloan (1 kb, 2 kb);

    8-10: Rat genomysk DNA-sjabloan (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

    11-18: DNA-sjabloan fan minsklik genoom (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 bp, 1090 bp (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Hege gefoelichheid
    Figuer 3. Ferskillende konsintraasjes fan rat- en minsklike DNA -fragminten waarden fersterke mei TIANGEN Taq MasterMix II (A), gewoan Taq Ming fan leveransier V (B) en leveransier TK (C), respektivelik, om de fersterkingsgefoelichheid te detektearjen. De resultaten litte sjen dat TIANGEN-produkt it doelfragment kin fersterke fanút de genoomsjabloan sa leech as 0,01 ng, en de gefoelichheid dêrfan is better dan dy fan 'e produkten fan Supplier V en TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTCTemplate input 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng.
    F: Gjin fersterkingsbands

    A-1 sjabloan

    ■ De sjabloan befettet proteïne -ûnreinheden as Taq -remmers, ensfh .——Zuiverje DNA -sjabloan, ferwiderje proteïne -ûnreinheden of extract sjabloan -DNA mei suveringskits.

    ■ De denaturaasje fan sjabloan is net kompleet —— Passend fergrutsje denaturationstemperatuer en ferlingje denaturationstiid.

    ■ Degradaasje fan sjabloan —— Stel de sjabloan opnij foar.

    A-2 Primer

    ■ Slechte kwaliteit fan primers —— Re-synthesize de primer.

    ■ Degradaasje fan primer ——Aliquotearje de primers mei hege konsintraasje yn lyts folume foar behâld. Foarkom meardere beferzen en ûntdûke as lang termyn 4 ° C kryopreserveare.

    ■ Unjildich ûntwerp fan primers (bgl. Primerlengte net genôch, dimer foarme tusken primers, ensfh.) -Resign primers (foarkomme foarming fan primer dimer en sekundêre struktuer)

    A-3 Mg2+konsintraasje

    ■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-4 Annealing temperatuer

    ■ De hege gloeitemperatuer hat ynfloed op de bining fan primer en sjabloan. ——Ferminderje de annealtemperatuer en optimalisearje de kondysje mei in helling fan 2 ° C.

    A-5 Utwreidingstiid

    ■ Koarte ferlingstiid —— Fergrutsje ferlingstiid.

    F: Falske posityf

    Fenomenen: Negative samples litte ek de doelfolgjende bannen sjen.

    A-1 fersmoarging fan PCR

    ■ Krúsbesmetting fan doelfolging as fersterkingsprodukten —— Foarsichtich it monster mei doelsekwinsje net foarsichtich pipette yn 'e negative stekproef of se út' e sintrifugebuis smite. De reagents of apparatuer moatte autoklave wurde om besteande nukleinsoeren te eliminearjen, en it bestean fan besmetting moat wurde bepaald troch negative kontrole -eksperiminten.

    ■ Kontaminaasje fan reagens ——Aliquot de reagentjes en bewarje se op lege temperatuer.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    ■ Unjildich primer-ûntwerp, en de doelfolging hat homology mei de net-doelfolging. —— Re-ûntwerp primers.

    F: Net-spesifike fersterking

    Fenomenen: De PCR-amplifikaasjebannen binne ynkonsistint mei de ferwachte grutte, itsij grut as lyts, of soms komme sawol spesifike amplifikaasjebannen as net-spesifike amplifikaasjebannen foar.

    A-1 Primer

    ■ Slechte primer -spesifisiteit

    —— Re-ûntwerp primer.

    ■ De primer -konsintraasje is te heech —— Fergrutsje de denaturaasje -temperatuer juste en ferlingje denaturaasje -tiid.

    A-2 mg2+ konsintraasje

    ■ De Mg2+ konsintraasje is te heech ——Krekt ferminderje de Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-3 Thermostable polymerase

    ■ Oermjittich enzymbedrach ——Ferminderje enzymehoeveelheid passend mei yntervallen fan 0,5 U.

    A-4 Annealing temperatuer

    ■ De gloeitemperatuer is te leech —— Passend ferheegje de annealtemperatuer as nim de twa-etappe gloeimetoade oan

    A-5 PCR-syklusen

    ■ Te folle PCR -syklusen ——Ferminderje it oantal PCR -syklusen.

    F: Patchy as smearbands

    A-1 Primer——Slechte spesifisiteit ——Re-ûntwerp de primer, feroarje de posysje en lingte fan 'e primer om de spesifisiteit te ferbetterjen; of nêst PCR útfiere.

    A-2 Template DNA

    ——De sjabloan is net suver—— Suverje de sjabloan as extract DNA mei suveringskits.

    A-3 Mg2+ konsintraasje

    ——Mg2+ konsintraasje is te heech ——Properyk ferminderje2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-4 dNTP

    ——De konsintraasje fan dNTP's is te heech ——Ferminderje de konsintraasje fan dNTP passend

    A-5 Annealing temperatuer

    —— Te lege annealtemperatuer —— Passend ferheegje de gloeitemperatuer

    A-6 syklusen

    ——Tefolle syklusen——Optimalisearje it syklusnûmer

    F: Hoefolle sjabloan -DNA moat wurde tafoege yn in 50 μl PCR -reaksysteem?
    ytry
    F: Hoe lange fragminten fersterkje?

    De earste stap is om de passende polymerase te kiezen. Regelmjittige Taq-polymerase kin net korrekturlêze fanwegen gebrek oan 3'-5 'eksonukleaseaktiviteit, en mismatch sil de útwreidingseffektiviteit fan fragminten sterk ferminderje. Dêrom kin gewoane Taq -polymerase doelfragminten grutter dan 5 kb net effektyf fersterkje. Taq -polymerase mei spesjale modifikaasje as oare high fidelity -polymerase moat wurde selekteare om de effisjinsje fan útwreiding te ferbetterjen en te foldwaan oan 'e behoeften fan amplifikaasje fan lange fragminten. Derneist fereasket de fersterking fan lange fragminten ek oerienkommende oanpassing fan primer-ûntwerp, denaturaasje-tiid, ferlingingstiid, buffer-pH, ensfh Normaal kinne primers mei 18-24 bp liede ta bettere opbringst. Om sjabloanskade te foarkommen, soe de denaturaasje -tiid by 94 ° C moatte wurde fermindere oant 30 sekonden of minder per syklus, en de tiid om temperatuer te ferheegjen nei 94 ° C foar amplifikaasje moat minder dan 1 min wêze. Boppedat kin de útwreidingstemperatuer ynstelle op sawat 68 ° C en it ûntwerpen fan de ferlingingstiid neffens de snelheid fan 1 kb/min kin soargje foar effektive amplifikaasje fan lange fragminten.

    F: Hoe kin de amplifikaasjegetrouheid fan PCR ferbettere wurde?

    De flaterpersintaazje fan PCR -amplifikaasje kin wurde fermindere troch ferskate DNA -polymerasen te brûken mei hege trou. Under alle Taq DNA -polymerasen dy't oant no ta binne fûn, hat Pfu -enzym it leechste flaterfrekwinsje en de heechste trou (sjoch taheakke tabel). Neist enzyme -seleksje kinne ûndersikers de PCR -mutaasjesnelheid fierder ferminderje troch optimalisearjen fan reaksjebetingsten, ynklusyf optimalisearjen fan buffersammensetning, konsintraasje fan thermostabele polymerase en optimalisearjen fan PCR -syklusnûmer.

    Skriuw jo berjocht hjir en stjoer it nei ús