Magnetyske boaiem en kruk DNA -kit

A-1 Lege konsintraasje fan sellen as firus yn it startmonster-Ferrykje de konsintraasje fan sellen as firussen.

A-2 Net genôch lysis fan 'e samples-De samples binne net deeglik mingd mei de lysisbuffer. It wurdt foarsteld om 1-2 kear deeglik te mingjen troch puls-vortexing. -Onfoldwaande sellysis feroarsake troch de fermindering fan aktiviteit fan proteinase K. It wurdt foarsteld om it weefsel yn lytse stikken te snijen en de badtiid te ferlingjen om alle resten yn it lysate te ferwiderjen.

A-3 Unfoldwaande DNA-adsorption. -Gjin ethanol as leech persintaazje ynstee fan 100% ethanol waard tafoege foardat it lysate waard oerbrocht nei de spinkolom.

A-4 De pH-wearde fan elueringsbuffer is te leech. -Pas de pH oan tusken 8.0-8.3.

Oerbliuwende ethanol yn 'e eluent.

-Der is restwaskpuffer PW yn it eluent. De ethanol kin wurde ferwidere troch de spin-kolom te sintrifugeren foar 3-5 min, en dan pleatse op keamertemperatuer as 50 ℃ ynkubator foar 1-2 min.

A-1 De stekproef is net farsk. - Extract in posityf sample -DNA as kontrôle om te bepalen oft it DNA yn it monster is degradearre.

A-2 Unjildige foarbehanneling. - Feroare troch oermjittich malen fan floeibere stikstof, herwinnen fan focht, of te grutte hoemannichte monster.

De foarbehandelingen moatte ferskille foar ferskate samples. Foar plantmonsters, soargje der dan foar dat jo deeglik slypje yn floeibere stikstof. Foar diermonsters homogenearje as grouwe mûle yn floeibere stikstof. Foar samples mei selwâlen dy't dreech te brekken binne, lykas G+ baktearje en gist, wurdt foarsteld om lysozym, lyticase as meganyske metoaden te brûken om de selwâlen te brekken.

4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kit oannimt in op kolom basearre metoade dy't chloroform fereasket foar de ekstraksje. It is foaral geskikt foar ferskate plantmonsters, lykas plant droech poeder. Hi-DNAsecure Plant Kit is ek op kolom basearre, mar sûnder ferfanging fan fenol/chloroform, wêrtroch it feilich en net-fergiftich is. It is geskikt foar planten mei hege polysaccharides en polyphenol -ynhâld. 4992709/4992710 DNAquick Plant System oannimt in op floeistof basearre metoade. Ekstraksje fan fenol/chloroform is ek net nedich. De suveringsproseduere is ienfâldich en fluch sûnder limyt foar de samplebedragen, sadat brûkers it bedrach fleksibel kinne oanpasse neffens de eksperimintele easken. Grutte grutte fan gDNA -fragminten kinne wurde krigen mei hege opbringst.

It genomyske DNA waard extracteare út ferskate voluminten fan minsklike folsleine bloedmonsters troch TIANamp Blood DNA Kit. De resultaten binne as folgjend. De resultaten wurde allinich as referinsje neamd, de eigentlike ekstraksjeresultaten binne ôfhinklik fan 'e omstannichheden fan monsters.

De ekstraksje fan bloedklont DNA kin wurde útfierd mei de reagents foarsjoen yn dizze twa kits troch gewoan it protokol te feroarjen yn 'e spesifike ynstruksje foar de DNA -ekstraksje fan bloedklont. De sêfte kopy fan it protokol foar ekstraksje fan bloedklont DNA kin op fersyk wurde útjûn.

Suspendearje it farske stekproef mei 1 ml PBS, normale sâltoplossing as TE -buffer. It monster folslein homogenisearje troch in homogenisator en sammelje it neerslag nei de boaiem fan in buis troch sintrifugearjen. Ferwiderje it supernatant en resuspendearje it neerslag mei 200 μl buffer GA. De folgjende DNA -suvering kin wurde útfierd neffens de ynstruksje.

Foar de suvering fan gDNA yn plasma-, serum- en lichemfloeistofmonsters wurdt TIANamp Micro DNA Kit oanrikkemandearre. Foar de suvering fan firus gDNA út serum/plasmamonsters wurdt TIANamp Virus DNA/RNA Kit oanrikkemandearre. Foar de suvering fan baktearjele gDNA út serum- en plasmamonsters wurdt TIANamp Bacteria DNA Kit oanrikkemandearre (lysozyme moat wurde opnommen foar positive baktearjes). Foar speekselmonsters wurde Hi-Swab DNA Kit en TIANamp Bacteria DNA Kit oanrikkemandearre.

DNAsecure Plant Kit of DNAquick Plant System wurde oanrikkemandearre foar ekstraksje fan skimmelgenoom. Foar ekstraksje fan genoomgenoom wurdt TIANamp Yeast DNA Kit oanrikkemandearre (lyticase moat sels taret wêze).