Blood Direct PCR Kit

Snelle fersterking fan it doelgen direkt mei help fan bloed as sjabloan sûnder ekstraksje.

Dizze kit oannimt in genetysk manipuleare anty-ynhibitor DNA-polymerase om genen fan ienkopie effisjint te fersterkjen yn it minsklike genoom. It goed optimalisearre buffersysteem yn dizze kit helpt de polymerase sterk tsjin de remming fan PCR -ynhibitoren te wjerstean, sadat DNA direkt kin fersterkje mei bloed en kultiveare sellen as sjabloanen. Dit produkt is maklik te betsjinjen en fereasket gjin yngewikkelde stappen lykas DNA -suvering of foarbyldfoarbehandeling.
Dizze kit wurdt levere as 2 × MasterMix, en de reaksje kin wurde útfierd troch gewoan tafoegjen fan it bloedsjabloan en byhearrende detectieprimers. It kin wurde tapast op 'e kultiveare sellen fan sûchdieren lykas minsken, mûzen, bargen, fee en oare soarten, lykas farske as 4 ℃ kryopreserveare folbloed, antikoagulant (EDTA, citraat, heparine), floeibere bloedklonters en droege bloedflekken opslein op Whatman 903 en FTA Elute kommersjele kaarten.

Kat. Nee	Packing Grutte
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Stjoer e -post nei ús

Produkt Detail

Eksperimintele foarbyld

FAQ

Produkt tags

Features

■ Ienfâldich en fluch: PCR -amplifikaasje kin direkt wurde útfierd mei bloed as sjabloan, sûnder de ferfeelsume stappen nedich te wêzen fan monsterfoarming en DNA -ekstraksje.
■ Hege suverens: it oerslaan fan foarbehandeling fan stekproeven en DNA-ekstraksje kin helpe om krúsbesmetting fan monsters te foarkommen.
■ Hege trochfier: De PCR-identifikaasje foar grutskalige samples kin wurde útfierd troch de kit te kombinearjen mei 96/384-well PCR-platen.
■ Sterke universaliteit: Dizze kit kin hege GC -fragminten as fragminten mei komplekse sekundêre struktuer effisjint fersterkje, en de amplifikaasjelengte kin oant 5 kb wêze.
■ Sterke stressresistinsje: Dizze kit kin wurde tapast foar ferskate soarten en bloedmonsters dy't op ferskate manieren binne bewarre.

Oanfraach

De PCR-produkten fan dizze kit befetsje "A" oan it 3'-ein, dat direkt kin wurde brûkt foar TA-fektorkloning. Dizze kit kin wurde brûkt foar de amplifikaasje fan genomyske DNA-fragminten, genetyske analyse mei hege trochput en genotyping (lykas gendeteksje) analyse.

Alle produkten kinne wurde oanpast foar ODM/OEM. Foar details,klikje asjebleaft op Oanpaste tsjinst (ODM/OEM)

Foarige: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Folgjende: Mûsweefsel Direct PCR Kit

	Mei it brûken fan minsklike EDTA -antikoagulaasje as sjabloan, waarden 4 genen mei ferskate GC -ynhâld fersterke troch Blood Direct PCR Kit. It PCR -reaksysteem wie 20 μl, en 1 μl bloed waard brûkt as sjabloan. M: TIANGEN Marker II; 1: Fragmentgrutte 1090 bp, GC -ynhâld 68,1%; 2: Fragmentgrutte 1915 bp, GC -ynhâld 70,4%; 3: Fragmentgrutte 448 bp, GC -ynhâld 74,8%; 4: Fragmentgrutte 1527 bp, GC -ynhâld 61,5%. Eksperimintele resultaten: Blood Direct PCR Kit kin DNA-fragminten effektyf amplifisearje mei de GC-ynhâld yn it berik fan 61,5%-74,8%, wat suggereart dat it yn steat is fragminten mei hege GC te fersterkjen.
	Gebrûk fan minsklike EDTA -antikoagulaasje as sjabloan, 5 genen mei ferskate lingten (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 en Hn4.0) waarden fersterke troch Blood Direct PCR Kit. It PCR -reaksysteem wie 20 μl, en 1 μl bloed waard brûkt as sjabloan. M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 ferskate bloedmonsters; NTC: kontrôle sûnder primers. Eksperimintele resultaten: Blood Direct PCR Kit kin fragminten fersterke mei de lingte sa lang as 4 kb, wat suggereart dat it yn steat is om lange fragminten te fersterkjen.
	Mei it brûken fan minsklike EDTA -antikoagulaasje as sjabloan, waard Blood Direct PCR Kit brûkt foar PCR -detectie fan ferskate bloedmonsters. It PCR -reaksysteem wie 20 μl, en 1 μl bloed waard brûkt as sjabloan. M: TIANGEN Marker II; 1-9: it laden bedrach fan bloed is respektivelik 0,1 μl, 0,2 μl, 0,3 μl, 0,4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl en 5 μl; NTC: kontrôle sûnder sjabloan Eksperimintele resultaten: Blood Direct PCR Kit hat sterke wjerstân tsjin bloed en kin bloedmonsters fersterke mei it laden berik fan 0.1-5 μl.
	Bloedmonsters fan minsken, rotten, kippen en oare soarten mei ferskate behannelingen waarden brûkt as sjabloanen. Blood Direct PCR Kit waard brûkt om PRNP (minske, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), en β-Actin (Chicken, 1.0 kb) te fersterkjen. It PCR -reaksjesysteem wie 20 μl, en 1 μl bloed waard brûkt as sjabloan. M: TIANGEN Marker II. Eksperimintele resultaten: Blood Direct PCR Kit kin wurde tapast op in breed skala oan samples, en de direkte PCR -detectie kin wurde útfierd op bloedmonsters fan ferskate soarten mei ferskate behannelingen.

F: Gjin fersterkingsbands

A-1 sjabloan

■ De sjabloan befettet proteïne -ûnreinheden as Taq -remmers, ensfh .——Zuiverje DNA -sjabloan, ferwiderje proteïne -ûnreinheden of extract sjabloan -DNA mei suveringskits.

■ De denaturaasje fan sjabloan is net kompleet —— Passend fergrutsje denaturationstemperatuer en ferlingje denaturationstiid.

■ Degradaasje fan sjabloan —— Stel de sjabloan opnij foar.

A-2 Primer

■ Slechte kwaliteit fan primers —— Re-synthesize de primer.

■ Degradaasje fan primer ——Aliquotearje de primers mei hege konsintraasje yn lyts folume foar behâld. Foarkom meardere beferzen en ûntdûke as lang termyn 4 ° C kryopreserveare.

■ Unjildich ûntwerp fan primers (bgl. Primerlengte net genôch, dimer foarme tusken primers, ensfh.) -Resign primers (foarkomme foarming fan primer dimer en sekundêre struktuer)

A-3 Mg²⁺konsintraasje

■ Mg²⁺ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg²⁺konsintraasje: Optimalisearje de Mg²⁺ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen²⁺ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

A-4 Annealing temperatuer

■ De hege gloeitemperatuer hat ynfloed op de bining fan primer en sjabloan. ——Ferminderje de annealtemperatuer en optimalisearje de kondysje mei in helling fan 2 ° C.

A-5 Utwreidingstiid

■ Koarte ferlingstiid —— Fergrutsje ferlingstiid.

F: Falske posityf

Fenomenen: Negative samples litte ek de doelfolgjende bannen sjen.

A-1 fersmoarging fan PCR

■ Krúsbesmetting fan doelfolging as fersterkingsprodukten —— Foarsichtich it monster mei doelsekwinsje net foarsichtich pipette yn 'e negative stekproef of se út' e sintrifugebuis smite. De reagents of apparatuer moatte autoklave wurde om besteande nukleinsoeren te eliminearjen, en it bestean fan besmetting moat wurde bepaald troch negative kontrole -eksperiminten.

■ Kontaminaasje fan reagens ——Aliquot de reagentjes en bewarje se op lege temperatuer.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg²⁺ konsintraasje: Optimalisearje de Mg²⁺ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen²⁺ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

■ Unjildich primer-ûntwerp, en de doelfolging hat homology mei de net-doelfolging. —— Re-ûntwerp primers.

F: Net-spesifike fersterking

Fenomenen: De PCR-amplifikaasjebannen binne ynkonsistint mei de ferwachte grutte, itsij grut as lyts, of soms komme sawol spesifike amplifikaasjebannen as net-spesifike amplifikaasjebannen foar.

A-1 Primer

■ Slechte primer -spesifisiteit

—— Re-ûntwerp primer.

■ De primer -konsintraasje is te heech —— Fergrutsje de denaturaasje -temperatuer juste en ferlingje denaturaasje -tiid.

A-2 mg²⁺ konsintraasje

■ De Mg²⁺ konsintraasje is te heech ——Krekt ferminderje de Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg²⁺ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen²⁺ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

A-3 Thermostable polymerase

■ Oermjittich enzymbedrach ——Ferminderje enzymehoeveelheid passend mei yntervallen fan 0,5 U.

A-4 Annealing temperatuer

■ De gloeitemperatuer is te leech —— Passend ferheegje de annealtemperatuer as nim de twa-etappe gloeimetoade oan

A-5 PCR-syklusen

■ Te folle PCR -syklusen ——Ferminderje it oantal PCR -syklusen.

F: Patchy as smearbands

A-1 Primer——Slechte spesifisiteit ——Re-ûntwerp de primer, feroarje de posysje en lingte fan 'e primer om de spesifisiteit te ferbetterjen; of nêst PCR útfiere.

A-2 Template DNA

——De sjabloan is net suver—— Suverje de sjabloan as extract DNA mei suveringskits.

A-3 Mg²⁺ konsintraasje

——Mg²⁺ konsintraasje is te heech ——Properyk ferminderje²⁺ konsintraasje: Optimalisearje de Mg²⁺ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen²⁺ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

A-4 dNTP

——De konsintraasje fan dNTP's is te heech ——Ferminderje de konsintraasje fan dNTP passend

A-5 Annealing temperatuer

—— Te lege annealtemperatuer —— Passend ferheegje de gloeitemperatuer

A-6 syklusen

——Tefolle syklusen——Optimalisearje it syklusnûmer

F: Hoefolle sjabloan -DNA moat wurde tafoege yn in 50 μl PCR -reaksysteem?

F: Hoe lange fragminten fersterkje?

De earste stap is om de passende polymerase te kiezen. Regelmjittige Taq-polymerase kin net korrekturlêze fanwegen gebrek oan 3'-5 'eksonukleaseaktiviteit, en mismatch sil de útwreidingseffektiviteit fan fragminten sterk ferminderje. Dêrom kin gewoane Taq -polymerase doelfragminten grutter dan 5 kb net effektyf fersterkje. Taq -polymerase mei spesjale modifikaasje as oare high fidelity -polymerase moat wurde selekteare om de effisjinsje fan útwreiding te ferbetterjen en te foldwaan oan 'e behoeften fan amplifikaasje fan lange fragminten. Derneist fereasket de fersterking fan lange fragminten ek oerienkommende oanpassing fan primer-ûntwerp, denaturaasje-tiid, ferlingingstiid, buffer-pH, ensfh Normaal kinne primers mei 18-24 bp liede ta bettere opbringst. Om sjabloanskade te foarkommen, soe de denaturaasje -tiid by 94 ° C moatte wurde fermindere oant 30 sekonden of minder per syklus, en de tiid om temperatuer te ferheegjen nei 94 ° C foar amplifikaasje moat minder dan 1 min wêze. Boppedat kin de útwreidingstemperatuer ynstelle op sawat 68 ° C en it ûntwerpen fan de ferlingingstiid neffens de snelheid fan 1 kb/min kin soargje foar effektive amplifikaasje fan lange fragminten.

F: Hoe kin de amplifikaasjegetrouheid fan PCR ferbettere wurde?

De flaterpersintaazje fan PCR -amplifikaasje kin wurde fermindere troch ferskate DNA -polymerasen te brûken mei hege trou. Under alle Taq DNA -polymerasen dy't oant no ta binne fûn, hat Pfu -enzym it leechste flaterfrekwinsje en de heechste trou (sjoch taheakke tabel). Neist enzyme -seleksje kinne ûndersikers de PCR -mutaasjesnelheid fierder ferminderje troch optimalisearjen fan reaksjebetingsten, ynklusyf optimalisearjen fan buffersammensetning, konsintraasje fan thermostabele polymerase en optimalisearjen fan PCR -syklusnûmer.

Skriuw jo berjocht hjir en stjoer it nei ús