2 × Pfu PCR -miks

Ultra-suvere Taq DNA-polymerase mei hege fidelity.

Pfu DNA Polymerase wurdt útdrukt út E.coli mei kloon Pyrococus Furiosis DNA Polymerase -gen en suvere en skieden troch suvering mei meardere kolommen. Om't Pfu 3'-5 'eksonukleaseaktiviteit hat, kin it korrekturlêze yn DNA-amplifikaasjeproses, wylst tradisjonele Taq DNA Polymerase dat net kin. Hoewol oare Taq DNA -polymerasen lykas Vent, Deep Vent, Tli, UITma, ensfh. Hawwe korreksjefunksjes, hat Pfu it leechste mismatch -taryf ûnder alle Taq DNA -polymerases dy't oant no ta binne fûn. Pfu DNA Polymerase hat bettere thermyske stabiliteit dan gewoan Taq DNA -polymerase, en it kin 1 oere mear dan 90% aktiviteit by 95 ° C behâlde.

Ien-buis Pfu PCR-miks (Nasjonale High-Tech Produktsertifikaasje)

■ De Pfu PCR Mix hat ferbettere spesifisiteit en gefoelichheid fan PCR -reaksje en kin komplekse sjabloanen fersterke mei hege GC -ynhâld, sekundêre struktuer en sa. Sa leech as 2 eksimplaren fan it doelsjabloan kinne wurde fersterke, en soargje foar krekter eksperimintele resultaten.

■ De unike Pfu MasterMix-formule makket it heule reaksjesysteem heul stabyl, en de aktiviteit sil net wurde beynfloede troch werhelle beferzen-ûntdwaan of opslach op lange termyn by 4 ° C.

■ De stabile en effisjinte foarbereide oplossing foar PCR-miks kin de operaasje fluch en ienfâldich meitsje, de arbeidsintensiteit en samplingflater sterk ferminderje. Hege prestaasjes PCR-enhancer en optimizer binne ek opnaam yn 'e miks, wat de easken fermindert foar PCR-omstannichheden.

■ Dit produkt hat sawol kleurstof-befettende as kleurstoffrije systemen. Dye-befettende PCR Mix-produkten kinne direkt nei PCR elektroforese wurde, sûnder samplebuffer ta te foegjen.

Kat. Nee Packing Grutte
4992780 1 ml
4992781 5*1ml
4992782 1 ml
4992906 5*1ml

Produkt Detail

Workflow

FAQ

Produkt tags

Aktiviteit definysje

De aktiviteit fan 1 ienheid (U) Pfu DNA Polymerase wurdt definieare as de hoemannichte enzyme dy't nedich is om 10 nmol deoxynucleotides op te nimmen yn soere-ûnoplosbere stoffen by 74 ° C binnen 30 min mei aktivearre salm sperm DNA as sjabloan/primer.

Kwaliteitsbeweitsing

De suverens troch SDS-PAGE-detectie is mear dan 99%; Gjin aktiviteit fan eksogene nuklease wurdt ûntdutsen; Ien-kopy-gen yn minsklik genoom koe effektyf wurde fersterke; Gjin signifikante aktiviteitsferoaring by opslaan by keamertemperatuer foar ien wike.

Main Technyske Parameters

It hat 3'-5 'exonuclease-aktiviteit en gjin 5'-3' exonuclease-aktiviteit. De útwreidingssnelheid fan DNA-amplifikaasje is leger dan dy fan Taq-polymerase, en oer it algemien is de útwreidingssnelheid fan Pfu-enzym 0.5-1 kb per minuut. De termyske stabiliteit fan Pfu is better dan Taq. Foar sjabloanen mei hege GC -ynhâld kin de denaturaasjetemperatuer wurde ferhege nei 98 ° C, wat gjin effekt hat op 'e aktiviteit fan Pfu -polymerase. It PCR-produkt is stompe-einige, dat kin wurde tafoege mei 3'-dA overhangs foardat ligeare mei TA-fektor of kloneare mei stompe-einige fektor

Oanfraach

It kin brûkt wurde foar amplifikaasje fan hege fidelity fan DNA, lykas klonen fan gene-ekspresje, side-rjochte mutaasje, single nucleotide polymorphism (SNP) analyse en ein reparearje.

Alle produkten kinne wurde oanpast foar ODM/OEM. Foar details,klikje asjebleaft op Oanpaste tsjinst (ODM/OEM)


  • Foarige:
  • Folgjende:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Brûk genomysk DNA as sjabloan om 1kb fragmint te fersterkjen.
    Nei de PCR -reaksje, nim 5 μl foar detectie fan elektroforese.
    F: Gjin fersterkingsbands

    A-1 sjabloan

    ■ De sjabloan befettet proteïne -ûnreinheden as Taq -remmers, ensfh .——Zuiverje DNA -sjabloan, ferwiderje proteïne -ûnreinheden of extract sjabloan -DNA mei suveringskits.

    ■ De denaturaasje fan sjabloan is net kompleet —— Passend fergrutsje denaturationstemperatuer en ferlingje denaturationstiid.

    ■ Degradaasje fan sjabloan —— Stel de sjabloan opnij foar.

    A-2 Primer

    ■ Slechte kwaliteit fan primers —— Re-synthesize de primer.

    ■ Degradaasje fan primer ——Aliquotearje de primers mei hege konsintraasje yn lyts folume foar behâld. Foarkom meardere beferzen en ûntdûke as lang termyn 4 ° C kryopreserveare.

    ■ Unjildich ûntwerp fan primers (bgl. Primerlengte net genôch, dimer foarme tusken primers, ensfh.) -Resign primers (foarkomme foarming fan primer dimer en sekundêre struktuer)

    A-3 Mg2+konsintraasje

    ■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-4 Annealing temperatuer

    ■ De hege gloeitemperatuer hat ynfloed op de bining fan primer en sjabloan. ——Ferminderje de annealtemperatuer en optimalisearje de kondysje mei in helling fan 2 ° C.

    A-5 Utwreidingstiid

    ■ Koarte ferlingstiid —— Fergrutsje ferlingstiid.

    F: Falske posityf

    Fenomenen: Negative samples litte ek de doelfolgjende bannen sjen.

    A-1 fersmoarging fan PCR

    ■ Krúsbesmetting fan doelfolging as fersterkingsprodukten —— Foarsichtich it monster mei doelsekwinsje net foarsichtich pipette yn 'e negative stekproef of se út' e sintrifugebuis smite. De reagents of apparatuer moatte autoklave wurde om besteande nukleinsoeren te eliminearjen, en it bestean fan besmetting moat wurde bepaald troch negative kontrole -eksperiminten.

    ■ Kontaminaasje fan reagens ——Aliquot de reagentjes en bewarje se op lege temperatuer.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ konsintraasje is te leech —— Korrekt ferheegje Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    ■ Unjildich primer-ûntwerp, en de doelfolging hat homology mei de net-doelfolging. —— Re-ûntwerp primers.

    F: Net-spesifike fersterking

    Fenomenen: De PCR-amplifikaasjebannen binne ynkonsistint mei de ferwachte grutte, itsij grut as lyts, of soms komme sawol spesifike amplifikaasjebannen as net-spesifike amplifikaasjebannen foar.

    A-1 Primer

    ■ Slechte primer -spesifisiteit

    —— Re-ûntwerp primer.

    ■ De primer -konsintraasje is te heech —— Fergrutsje de denaturaasje -temperatuer juste en ferlingje denaturaasje -tiid.

    A-2 mg2+ konsintraasje

    ■ De Mg2+ konsintraasje is te heech ——Krekt ferminderje de Mg2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-3 Thermostable polymerase

    ■ Oermjittich enzymbedrach ——Ferminderje enzymehoeveelheid passend mei yntervallen fan 0,5 U.

    A-4 Annealing temperatuer

    ■ De gloeitemperatuer is te leech —— Passend ferheegje de annealtemperatuer as nim de twa-etappe gloeimetoade oan

    A-5 PCR-syklusen

    ■ Te folle PCR -syklusen ——Ferminderje it oantal PCR -syklusen.

    F: Patchy as smearbands

    A-1 Primer——Slechte spesifisiteit ——Re-ûntwerp de primer, feroarje de posysje en lingte fan 'e primer om de spesifisiteit te ferbetterjen; of nêst PCR útfiere.

    A-2 Template DNA

    ——De sjabloan is net suver—— Suverje de sjabloan as extract DNA mei suveringskits.

    A-3 Mg2+ konsintraasje

    ——Mg2+ konsintraasje is te heech ——Properyk ferminderje2+ konsintraasje: Optimalisearje de Mg2+ konsintraasje troch in searje reaksjes fan 1 mM oant 3 mM mei in ynterval fan 0,5 mM om de optimale Mg te bepalen2+ konsintraasje foar elke sjabloan en primer.

    A-4 dNTP

    ——De konsintraasje fan dNTP's is te heech ——Ferminderje de konsintraasje fan dNTP passend

    A-5 Annealing temperatuer

    —— Te lege annealtemperatuer —— Passend ferheegje de gloeitemperatuer

    A-6 syklusen

    ——Tefolle syklusen——Optimalisearje it syklusnûmer

    F: Hoefolle sjabloan -DNA moat wurde tafoege yn in 50 μl PCR -reaksysteem?
    ytry
    F: Hoe lange fragminten fersterkje?

    De earste stap is om de passende polymerase te kiezen. Regelmjittige Taq-polymerase kin net korrekturlêze fanwegen gebrek oan 3'-5 'eksonukleaseaktiviteit, en mismatch sil de útwreidingseffektiviteit fan fragminten sterk ferminderje. Dêrom kin gewoane Taq -polymerase doelfragminten grutter dan 5 kb net effektyf fersterkje. Taq -polymerase mei spesjale modifikaasje as oare high fidelity -polymerase moat wurde selekteare om de effisjinsje fan útwreiding te ferbetterjen en te foldwaan oan 'e behoeften fan amplifikaasje fan lange fragminten. Derneist fereasket de fersterking fan lange fragminten ek oerienkommende oanpassing fan primer-ûntwerp, denaturaasje-tiid, ferlingingstiid, buffer-pH, ensfh Normaal kinne primers mei 18-24 bp liede ta bettere opbringst. Om sjabloanskade te foarkommen, soe de denaturaasje -tiid by 94 ° C moatte wurde fermindere oant 30 sekonden of minder per syklus, en de tiid om temperatuer te ferheegjen nei 94 ° C foar amplifikaasje moat minder dan 1 min wêze. Boppedat kin de útwreidingstemperatuer ynstelle op sawat 68 ° C en it ûntwerpen fan de ferlingingstiid neffens de snelheid fan 1 kb/min kin soargje foar effektive amplifikaasje fan lange fragminten.

    F: Hoe kin de amplifikaasjegetrouheid fan PCR ferbettere wurde?

    De flaterpersintaazje fan PCR -amplifikaasje kin wurde fermindere troch ferskate DNA -polymerasen te brûken mei hege trou. Under alle Taq DNA -polymerasen dy't oant no ta binne fûn, hat Pfu -enzym it leechste flaterfrekwinsje en de heechste trou (sjoch taheakke tabel). Neist enzyme -seleksje kinne ûndersikers de PCR -mutaasjesnelheid fierder ferminderje troch optimalisearjen fan reaksjebetingsten, ynklusyf optimalisearjen fan buffersammensetning, konsintraasje fan thermostabele polymerase en optimalisearjen fan PCR -syklusnûmer.

    Skriuw jo berjocht hjir en stjoer it nei ús